傳代

 

1、貼壁細胞傳代時，先用消化液潤洗一遍；棄掉后，再加入適量消化液置于孵箱或鏡下觀察消化；當細胞變圓，彼此之間產生空隙，加入等量或大量的培養基終止消化，培養基中的血清可以抑制胰蛋白酶的活性。

2、這里我沒有明確提到胰蛋白酶的濃度，并不是說濃度越高越好。胰蛋白酶底物的特異性差，會破壞細胞膜成分。PH8.0，37度環境下，消化液的消化能力是很強的。培養基中的血清會降低胰酶的消化能力，所以每次消化前，也要用PBS反復沖洗干凈培養皿。日常用的比較多的消化液濃度：a)0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

b)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA

c)0.25%胰蛋白酶

3、傳代后如果細胞不貼壁，可能的原因是胰蛋白酶消化過度或者沒有清洗干凈EDTA。

4、懸浮細胞傳代時，正常收集細胞、離心濃縮、用培養基重懸就可以了。懸浮細胞每次換液都需要離心重懸，但是由于懸浮細胞一般會處于單細胞層生長，有的時候生長速度很快，重懸后如果不晃動培養皿，就會看到細胞成團；如果經常顯示懸浮細胞大量抱團生長，也有可能是培養基中的血清問題、或者鈣鎂離子濃度的變化造成了細胞間的粘附力改變。

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